Количественный допинг-тест пептидных гормонов
Количественная оценка пептидных гормонов в допинг-тестах
Источник:
Эндокриная система, спорт и двигательная активность.
Перевод с англ./под ред. У.Дж. Кремера и А.Д. Рогола. - Э64
Издательство: Олимп. литература, 2008 год.
Всемирный антидопинговый кодекс олимпийского движения от 1 января 2003 г. содержит следующую формулировку: “присутствие повышенной концентрации эндогенного гормона в классе (Е) или его диагностического маркера (маркеров) в моче спортсмена считается нарушением, если только не будет доказано, что это обусловлено его особым физиологическим или патологическим состоянием” (см. www.wada-ama.org). К сожалению, в случае пептидных гормонов определение “повышенной концентрации" гормона в ряде случаев является чрезвычайно сложным или даже невозможным. Секреция некоторых пептидных гормонов в организме человека происходит ритмично, т. е. содержание гормона в крови подчиняется циркадному ритму. Более того, уровень секреции гормона зависит не только от возраста и пола человека, но и от внешних условий (температура, атмосферное давление), стресса (психологического или физиологического), режима сна, характера питания или режима тренировки. Время жизни большинства пептидных гормонов чрезвычайно непродолжительно и это также приводит к значительным колебаниям их концентрации в крови. Таким образом, простое определение содержания гормона лишь в отдельных случаях (хорионический гонадотропин у мужчин) позволяет показать злоупотребление гормональными препаратами. Несмотря на заявления, которые появляются иногда в общественной прессе, высокая концентрация соматотропного гормона человека, например, ни в коей мере не может считаться достаточным доказательством использования спортсменом рекомбинантного СТГ (Armanini et al., 2002).
Еще одна проблема заключается в детекции пептидных гормонов рекомбинатного происхождения, используемых в качестве допинга. Полученные путем экспрессии в системе in vitro белка, кодируемого последовательностью гена человека, гормоны искусственного происхождения идентичны природным гормонам по своей аминокислотной последовательности, а значит, и по физико-химическим свойствам. После инъекции гормона в организм выяснить происхождение отдельной молекулы гормона представляется уже невозможным.
Проведение детекции пептидных гормонов с целью допинг-контроля осложняется еще и тем, что в отличие от простых, небольших и стабильных молекул стероидных гормонов пептидные гормоны — это большие молекулы с очень сложной и лабильной трехмерной структурой. Во многих случаях пептидные гормоны очень быстро деградируют, вовлекаются в процессы метаболизма и расщепляются. Процессы выведения с мочой очень сложны и многие из них до сих пор остаются непонятыми. Кроме того, концентрация пептидных гормонов в моче часто намного ниже их содержания в крови. Это означает, что моча — биологический материал, который традиционно используется при проведении анализов для допинг-контроля, — в случае большинства тестов на пептидные гормоны обладает ограниченной ценностью. Необходимо проведение анализов крови со всеми вытекающими отсюда этическими и правовыми проблемами (Birkeland, Hem-mersbach, 1999).
Наконец, проблемы, связанные с созданием тестов для допинг-контроля пептидных гормонов, обусловлены методическими различиями в определении пептидных и стероидных гормонов, описанных выше. Стероидные гормоны в течение ряда лет определяются методами газовой хроматографии и масс-спектрометрии (ГХ/МС), благодаря чему в аккредитованных Международным олимпийским комитетом (МОК) лабораториях имеется соответствующее аналитическое оборудование и накоплен достаточный опыт. Во многих случаях ГХ/МС рассматривается в качестве эталона или “золотого стандарта” при определении гормонов. К сожалению, эти методы никогда не применялись для анализа пептидных гормонов, и в настоящее время все еще не разработан протокол, который можно было бы применять при проведении допинг-контроля (Bowers, 1997; Hilderbrand et al., 2003). Все методы определения пептидных гормонов, которые существуют в настоящее время или, как предполагается, будут разработаны в ближайшем будущем, основаны на методе иммуноанализа, в случае эритропоэтина, дополненного подтверждением с использованием изоэлектрофокусироваиия (ИЭФ).
Проверенные форумы спортивной фармакологии