Количественное определение глицина в таблетках
Разработка методики количественного определения глицина в таблетках
С целью подтверждения возможности использования реакции а-аминокислот с 0,2 % водным раствором нингидрина в количественном анализе нами проведено количественное определение глицина в таблетках.
В соответствии с ФСП на глицин таблетки сублингвальные 0,1 г одна таблетка имеет состав:
- Глицин 0,1
- Метилцеллюлоза водорастворимая (марки МЦ 100) 0,001
- Магния стеарат 0,001
- Масса таблетки 0,102 г
Для количественного анализа 0,1 г (точная навеска) порошка из 20 растертых таблеток, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в горячей воде, после охлаждения раствор доводят водой до метки и фильтруют через стеклянный фильтр № 3. При этом из раствора удаляют магния стеарат, снижающий интенсивность светопоглощения продукта нингидриновой реакции и, как следствие - воспроизводимость результатов анализа.
При приготовлении раствора глицина из таблеток в него, наряду с основным веществом (глицином), переходит водорастворимая метилцеллюлоза. Поэтому нами были изучены спектральные характеристики 0,1 % раствора метилцелпюлозы в условиях проведения реакции с водным раствором нингидрина: к 1 мл 0,1 % раствора метилцелпюлозы прибавляли 1,1 мл 0,2 % водного раствора нингидрина. Полученную смесь нагревают при температуре 120 °С в течение 20 мин, после чего продукт реакции разбавляют водой до 100 мл и, спустя 1 ч после начала реакции, определяли оптическую плотность исследуемого образца при длине волны 400 нм.
Установлено, что метилцеллюлоза в условиях проведения реакции не поглощает при длине волны 400 нм, а значит, её присутствие в растворе а-аминокислот не влияет на ход реакции с водным раствором нингидрина.
На этом основании нами предложена следующая методика проведения количественного анализа: к 1 мл полученного из навески таблеток глицина раствора прибавляют 1,1 мл 0,2 % водного раствора нингидрина и нагревают при температуре 120 °С в течение 20 мин. После полного охлаждения продукт разбавляют водой до 100 мл и через 1 ч после начала реакции определяют оптическую плотность при длине волны 400 нм на спектрофотометре в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм.
Параллельно проводят реакцию свежеприготовленного 0,1 % раствора стандартного образца глицина с 0,2 % водным раствором нингидрина и определяют оптическую плотность в аналогичных условиях. Стандартный образец глицина получен многократной дробной кристаллизацией фармакопейного глицина из водно-этанольной смеси.
Содержание глицина в таблетках (X), % вычисляют по формуле:
Х=[Dx*mo*(100-W)*100%]/[Do*mx*100]
Dx - оптическая плотность продукта реакции 0,1 % раствора глицина, приготовленного из таблеток, с 0,2 % водным раствором нингидрина;
D0 - оптическая плотность продукта реакции 0,1 % раствора стандартного образца глицина с 0,2 % водным раствором нингидрина;
m0 и mх - средние массы навесок стандартного образца глицина и глицина из растёртых таблеток, соответственно, г;
W- остаточная влажность субстанции стандартного образца глицина (0,1 %); На основании проведённых шести параллельных испытаний получены результаты, которые приведены в таблице 9.
Таблица 9. Результаты количественного определения глицина в таблетках
|
№ эксперимента |
Навеска глицина в растертых таблетках, г |
Навеска стандартного глицина, г |
Оптическая плотность при λ = 400 нм продукта реакции |
Содержание глицина в таблетках, % | |
|
глицина из таблеток |
Стандартного глицина | ||||
|
1 |
0,00098 |
0,00099 |
0,45 |
0,46626 |
97,4 |
|
2 |
0,00099 |
0,000995 |
0,4545 |
0,46188 |
98,8 |
|
3 |
0,000994 |
0,00101 |
0,45655 |
0,46717 |
99,2 |
|
4 |
0,00099 |
0,001 |
0,45879 |
0,46552 |
99,45 |
|
5 |
0,000995 |
0,00102 |
0,45941 |
0,4719 |
99,7 |
|
6 |
0,001 |
0,00103 |
0,45745 |
0,46976 |
100,2 |
Нами проведена статистическая обработка результатов количественного определения глицина в таблетках в соответствии с ГФ XI (табл. 10).
Таблица 10. Статистическая обработка результатов количественного определения глицина в таблетках
|
f |
<х>, % |
s2* |
S |
Р,% |
t(P,f) |
t„bI4(P,f) |
Ах |
€,% |
|
5 |
99,13 |
0,93575 |
0,9673 |
95 |
2,57 |
2,2 |
2,49 |
2,51 |
В соответствии с ФСП допустимые нормы отклонений в количественном содержании глицина в таблетках составляют ±10 %. На основании данных таблицы 10 видно, что все полученные результаты соответствуют допустимым нормам отклонений, а среднее значение количественного содержания глицина в таблетках составляет 99,13 %, что говорит о достаточно высокой точности метода. Кроме того, разработанный метод характеризуется достаточно высокой воспроизводимостью, относительная ошибка результата отдельного определения составила ±2,51 %. Метод не требует дорогостоящего оборудования и реактивов и доступен для большинства лабораторий, что обуславливает перспективность его использования в количественном анализе a-аминокислот в лекарственных препаратах.