4702
правки
Изменения
Нет описания правки
== Разработка методики количественного определения суммы аминокислот в шроте яблок ==
Нами изучена возможность использования нингидриновой реакции в количественном анализе суммы свободных а-[[Аминокислоты|аминокислот ]] в шроте яблок. Кроме того, нами проведена оптимизация и оценка количественного содержания а-аминокислот в сырье после кислотного гидролиза.
Приготовление образца 1. 10,0 г сырья (точная навеска), высушенного до воздушно-сухого состояния шестикратно экстрагируют горячей водой по 1 ч при температуре 80-90 °С (гидромодуль 1:8). Полученные извлечения фильтруют, объединяют, переносят в мерную колбу вместимостью 500 мл и доводят водой до метки (далее - исходное извлечение или образец 1).
Нами установлено, что из всех изученных а-аминокислот продукт взаимодействия пролина с нингидрином при длине волны 400 нм характеризуется наибольшей стабильностью (за период 1—1,5 ч после начала реакции интенсивность светопоглощения снижается на 0,2 %). На этом основании мы установили предельные концентрации пролина в нингидриновой реакции, подчиняющиеся закону светопоглощения, а именно 0,016-0,072 мг/мл (рис 17).
[[Image:Ningidr17.jpg|250px|thumb|right|Рис 17. Калибровочный график продукта реакции пролина]]
К 1,5 мл исследуемых извлечений (образцы 1 и 2) добавляют 1,7 мл 0,2 % водного раствора нингидрина и нагревают при температуре 120 °С в течение 20 мин. После полного охлаждения отбирают по 2 мл каждого из продуктов реакции и разбавляют их водой: до 10 мл (образец 1) и до 5 мл (образец 2) и спустя 1 ч после начала реакции определяют оптическую плотность при длине волны 400 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм.
Содержание суммы аминокислот в образцах относительно пролина вычисляют по формуле:
Х=[Dx *mo*100*a*100%]/[Do*mx*(100- оптическая плотность продуктов реакции исследуемых образцов сW)*b]
Dx - оптическая плотность продуктов реакции исследуемых образцов с 0,2 % водным раствором нингидрина;
Do - оптическая плотность продукта реакции 0,017 % раствора стандартного образца пролина с 0,2 % водным раствором нингидрина;
<table cellpadding="7" border="1">
<tr><td rowspan="2">
<p>№</p><p>эксперимента</p></td><td rowspan="2"><p>Навеска шрота яблок г’г</p></td><td rowspan="2">
<p>Навеска пролина, г</p></td><td colspan="2">
<p>Оптическая плотность при Х=400 нм продукта реакции</p></td><td>
</table>
'''Таблица 12. Результаты количественного определения суммы свободных ota-аминокислот в шроте яблок, очищенном от балластных ВМС.'''
<table cellpadding="7" border="1">
Однако, исходное извлечение шрота яблок (образец 1) и гидролизат (образец 3) содержат вещества, реагирующие с нингидрином (пептиды и белки), влияющие на изменения значений оптической плотности. Это приводит к ошибкам результатов количественного содержания а-аминокислот в сырье. Поэтому, для получения достоверных результатов, отражающих количественное содержание суммы а-аминокислот в растительном сырье, необходимо проводить его очистку от сопутствующих ВМС, например, с помощью осаждения этанолом, как описано выше.
Таким образом, проведение кислотного гидролиза способствует увеличению содержания суммы а-аминокислот в шроте яблок до 1,711 % в пересчете на пролин,что значительно превышает аналогичный показатель для исходного сырья - 1,112 %. Это позволит в дальнейшем разработать на основе кислотного гидролизата малотоксичные препараты широкого спектра фармакологической активности, обогащенные a-аминокислотами. == Читайте также ==